基于自身分子酶进化技术平台（In silico Design & in vitro Evolution Workflow），并持续聚焦LAMP恒温扩增技术，HaiGene全新升级的Bst4.2系列，将LAMP扩增技术推入了新的高度。热启动Bst4.2系列在保持Bst4.0 通扩的能力的基础上，全系包含热启动Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>95%,在>60℃时1min内酶活完全释放。现阶段，热启动HotStart Bst4.2 Polymerase为已知的LAMP扩增最佳用酶，与普通LAMP扩增体系相比它有绝对的优势。
反应温度提升至70℃，引物配对更加严谨，粗样本的核酸释放更加充分。
四引物扩增体系性能和速度堪比六引物体系，使得引物筛选难度降低。
Helicaser的加入使得反应无需F3/B3引物，FIP/BIP引物浓度也可进一步降低。
高亲和力的Aptamer使得反应体系易于建立，并维持均一的扩增性能。
基于Bst4.2的HNB变色反应颜色对比更加明显，且保留了其对样品和缓冲液的高耐受性。
建立了基于链置换的Probe-LAMP方法，只需改造一条环引物。
实例性能展示
1、Bst 4.2热启动性能展示
Bst 4.2热启动性能展示采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性。
2、以Bst 4.2 SYBR Green试剂进行标准LAMP和eLAMP扩增比较
以human Total RNA为模板，采用RnaseP LAMP Primer进行标准LAMP和eLAMP 扩增。在25ul扩增体系中加入10ng、1ng和0ng的RNA，70℃反应40min。从扩增结果可获得，在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除，对扩增速度几乎无影响，并且非特异性扩增得到改善。 6 Primer LAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM。 4 Primer eLAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM。
3、以Bst 4.2 Basic试剂进行DP-eLAMP探针法扩增
在众多的探针法LAMP测试中，DP-LAMP探针法(Displaceable Probe LAMP)为HaiGene推荐的使用方法（参考PMID: 33626039）。在LAMP扩增中将LF或LB引物退火至互补的猝灭oligo，利用链置换活性获得游离的荧光信号（可参考HaiGene A3831-21说明书资料）。该方案可进一步降低LAMP的非特异扩增。下图为DP-eLAMP进行三种荧光标记探针的实验数据。结果显示HotStart Bst4.2总能获得高特异性和高重复性的扩增。
4、以Bst4.2 L-HNB 试剂进行L-HNB (紫罗兰-淡绿) 变色反应（肉眼观察）
以2019-nCoV体外转录RNA为模板，采用eLAMP扩增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 对10000、1000、100、25copies/管的阳性RNA进行检测，ddH20为阴性对照（4重复）。下图为70℃反应30min 后的检测结果。结果表明L-HNB法获得清晰易于区分的颜色变化，极易区分阳性和阴性扩增。
5、 以Bst4.2 Red试剂进行LAMP红黄变色扩增
以2019-nCoV体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为70℃反应30min后。
6、 以Bst 4.2 Basic试剂搭配 OG 橙绿变色反应管（A3821）
以2019-nCoV体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为70℃反应30min后。
