引言 上一期我们分享了基于体外纯化蛋白的化学偶联标记法，这种“先纯化，后修饰”的策略，特别适合难表达配体的受体鉴定。但对于大多数易于在哺乳动物细胞中表达的分泌蛋白而言，还有一...
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如何寻找「分泌蛋白」靶细胞的「膜上受体」②：基因融合酶标记法 -
如何寻找「分泌蛋白」靶细胞的「膜上受体」①：体外化学偶联标记法引言 从肿瘤微环境中筛选出一个全新分泌蛋白，它能显著抑制癌细胞增殖。然而当开发靶向药物时，却卡在最关键的一步——找不到它在细胞膜上的受体。这并非个案：人类基因组中超过30%的...
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BioID、TurboID、APEX与PUP-IT四大邻近标记在「膜蛋白互作」应用中的深度对比引言 在后基因组时代的生物医学研究中，膜蛋白作为细胞与外界交互的核心门户，占据人类基因组编码蛋白的约30%，更是超过60%临床药物的直接作用靶点。但传统技术如免疫共沉淀（Co...
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从BioID到TurboID：12个案例解码植物蛋白互作与邻近标记的适配密码引言 在植物分子生物学中，蛋白质互作是细胞生命活动的核心，但在面对植物坚硬细胞壁、液泡释放的蛋白酶与次生代谢物，以及弱瞬时的核心调控互作时，传统方法往往力不从心。 邻近标记（...
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TurboID/miniTurbo邻近标记：赋能植物「低丰度蛋白互作」与「稀有亚细胞蛋白」研究引言 在植物分子生物学研究中，解析蛋白质的互作网络和亚细胞定位是理解细胞功能的基石。然而，当我们的研究对象是低丰度蛋白或稀有细胞类型时，传统的生化手段往往显得力不从心。 今天...
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从「未知」到「已知」的靶点验证：DARTS技术实操指南与常见问题诊断01 前言 药物靶点的鉴定与验证是药物研发的核心环节，直接决定了药物研发的成功率。DARTS（Drug Affinity Responsive Target Stabilit...
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从裂解液到活细胞：GST/His/Flag/Strep Pull-down vs. PL-MS，如何精准捕获瞬时/弱/膜蛋白互作？引言 解析蛋白质-蛋白质相互作用（PPIs）是解码生命分子机制的核心命题。长期以来，基于亲和标签的Pull-down实验及其衍生技术（如Co-IP、AP-MS）作为经典手段，...
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邻近标记PL-MS之质粒构建策略：过表达与原位表达的精准抉择及应用指南引言 质粒构建是生物医学研究的核心技术基石，其元件选择（启动子、编码序列、标签等）直接决定了基因功能探究的提问方式与结论可靠性。 长期以来，强启动子（如CMV）驱动的过表达质...
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2D-TPP热蛋白组分析：如何快速区分宿主蛋白与病毒蛋白？在抗病毒药物研发中，我们常被两个核心问题困住：小分子药物究竟作用于病毒的哪个靶点，始终难以精准确认；即便找到了潜在靶点，也很难厘清它是病毒自身编码的蛋白，还是宿主细胞被病毒劫...
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BioID/TurboID/APEX2邻近标记PL-MS：从实验室到应用场的全景图鉴经过前面四篇的探险，我们见证了PL-MS技术的完整进化史：从KyleRoux的BioID打破传统技术桎梏，到AliceTing的APEX实现速度突破，再到TessBranon...
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翻译后修饰大盘点：从磷酸化到乳酸化，科研人必备的修饰鉴定研究指南！前言 如果说基因组是生命的“设计蓝图”，那么蛋白质组就是将蓝图转化为实际功能的“施工团队”，而翻译后修饰（Post-TranslationalModifications,PT...
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邻近标记质谱技术PL-MS：解锁突触间隙的20纳米禁区引言：从“时间”到“空间”的终极挑战 上一篇我们见证了TurboID的诞生——它用10分钟的快速标记和无毒特性，解决了PL-MS技术的“时间”难题，让我们能在活体模型中自由探...
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PL-MS邻近标记之质粒构建进阶篇：CRISPR基因编辑核心步骤拆解与质控标准（含问题排查）引言 完成载体顶层设计与克隆策略选择后，实验的核心便转向“落地执行”——如何将设计方案转化为功能稳定的重组质粒？ 实操中，sgRNA设计不当、酶切星号活性、连接摩尔比失调、菌...
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蛋白互作干货 | 如何构建合格的重组表达质粒（初学者篇）在生物医学研究中，重组表达质粒是药物靶点筛选、CRISPR基因编辑等课题的“第一公里”，其质量直接决定后续实验的成败。 我们往往能轻松获得“能用”的质粒——序列正确、可抗药筛...
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邻近标记质谱技术PL-MS：TurboID与miniTurbo的诞生引言：一场“不可能三角”的攻坚之战 上一篇我们看到，APEX 技术用 1 分钟的“闪电标记”打破了 BioID 的速度困境，但H2O2的毒性让它难以应用于活体模型；而 Bio...
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【蛋白互作研究】邻近标记PL-MS实验指南：如何精准获取目标蛋白的基因序列？引言 随着空间蛋白质组学的飞速发展，邻近标记质谱技术（ProximityLabelingMassSpectrometry,PL-MS）已成为解析细胞内蛋白质互作网络（PPIs...
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PL-MS邻近标记质谱技术与蛋白动态网络如何重构你的互作研究？不仅是“锁与钥匙”：揭秘细胞内看不见的“隐形社交网” 作为一名生物医学研究者，当你在课题组会上提到“蛋白相互作用”（Protein-ProteinInteractions,P...
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【蛋白互作研究】如何精准区分RNA/DNA/蛋白互作模式引言 后基因组时代，功能蛋白质组学的核心已从单纯的蛋白鉴定，转向对蛋白质分子社交网络的精细解析。对于手握未知功能靶蛋白的研究者而言，最关键的疑问莫过于：它究竟通过何种方式“对...
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【蛋白互作研究】APEX与BioID邻近标记技术（PL-MS）终极对比：速度与毒性的权衡如何选择？引言：速度与毒性的两难抉择 上一篇《邻近标记质谱技术PL-MS的十年探险之路-知乎》我们见证了BioID技术的诞生——它像一把“分子喷漆罐”，解决了传统方法无法研究难溶蛋白和...
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邻近标记质谱技术PL-MS的十年探险之路细胞，这个生命的基本单元，内部藏着无数未解之谜。蛋白质作为生命活动的核心执行者，它们之间的相互作用就像一场精密的“分子对话”。然而，在邻近标记（PL）技术出现前，我们只能借助...