前言 在生命科学研究领域，膜蛋白始终是绕不开的核心研究对象。作为镶嵌或附着在细胞膜上的关键分子，它不仅主导着细胞物质运输、信号转导、细胞识别等核心生命过程，更是药物研发的“黄...
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膜蛋白提取攻略 | 从粗分到纯化：去垢剂筛选、纳米盘重构到生物素标记富集的全覆盖选择指南 -
液-液相分离研究 | 邻近标记PL-MS重构转录调控、应激响应与肿瘤免疫新视野前言 细胞内纷繁复杂的生命活动，如何在微米级的空间内实现精准、有序的时空调控？液液相分离（LLPS）的发现，为我们揭示了细胞无膜区室化的核心奥秘，成为近十年来生命科学领域的前...
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「膜蛋白互作最新进展」SPARK-seq与适体组学：单细胞分辨率下的膜表面天然蛋白互作解析引言 近年来，尽管人类基因组计划与AlphaFold等结构预测工具极大地丰富了我们对蛋白质序列与折叠的认知，但针对膜蛋白的原位功能研究与配体开发仍面临显著的方法学瓶颈。膜蛋白...
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APEX-seq/BioID邻近标记（PL-MS）技术：解码RNA颗粒的蛋白质组成及相互作用网络引言 真核细胞的空间区室化是生命活动有序进行的核心基础。除线粒体、内质网等经典有膜细胞器外，由RNA与RNA结合蛋白（RBPs）通过液-液相分离（LLPS）组装而成的RNA颗...
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如何用邻近标记质谱（PL-MS）技术破解脑肠轴的跨器官对话？引言 肠道不只是人体的消化器官，更是一座庞大的内分泌器官。它分泌的数百种蛋白、细胞因子与胞外囊泡（EVs），如同穿梭在体内的“信使”，穿越血液循环、跨过血脑屏障（BBB），精...
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5年1.5万篇文献大数据：靶点筛选双子星有限蛋白水解质谱（LiP-MS）与热蛋白组分析（TPP）的全景对比引言 药物靶点筛选是新药研发的核心环节，有限蛋白水解质谱（LiP-MS）与热蛋白组分析（TPP）作为该领域的两大核心技术，凭借高灵敏度、高通量的技术优势，近五年在全球范围内实...
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邻近标记PL-MS重构病毒-宿主互作图谱 —— 基于SARS-CoV-2、MHV及流感病毒经典研究的深度复盘与思考引言 做病毒学研究的朋友都知道，病毒是典型的“胞内寄生虫”，它的一生——从入侵、复制到组装释放，完全依赖于宿主细胞的分子机器。我们要想搞清楚病毒的致病机理，或者寻找新的抗病毒...
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【药物靶点筛选】免修饰药物靶点筛选策略深度解析：技术原理、实操指南与选型决策引言 现代药物研发中，表型筛选到靶点验证的过程颇具挑战。传统筛选常用荧光、发光或放射性同位素标记，这类“外源性标签”虽方便信号检测，却像“双刃剑”，易因空间位阻改变靶蛋白天然...
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【药物靶点筛选】如何判断我的化合物在进行筛选靶点时是否能够进行修饰？引言 在药物靶点筛选过程中，许多研究者都被一系列实操难题困住： 化合物修饰是否会影响我的药物活性？ 什么化合物适合做修饰，什么化合物特征不适合做修饰？ 我们该如何判断手中的化...
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拆分式邻近标记 | Contact-ID、Split-APEX2与Split-TurboID在细胞器接触位点研究中的应用解析引言 在研究线粒体-内质网接触位点（MAM）时，明明推测存在未知调控蛋白，却被背景噪声干扰无法精准鉴定？想捕捉激素诱导的瞬时细胞器接触信号，却因时间分辨率不足错失关键数据？这...
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靶蛋白研究中基因敲除、敲入、点突变、RNA编辑与表观遗传编辑的区别与应用引言 在生命科学研究中，靶蛋白的功能解析、调控机制探索及疾病关联验证是核心命题，而基因编辑技术凭借其精准调控靶蛋白表达、结构与定位的能力，已成为该领域不可或缺的核心工具。然而...
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邻近标记酶谱解析：基于BioID家族「BioID/TurboID/AirID/ultraID」和过氧化物酶家族「APEX/APEX2」的深度对比引言 邻近标记（PL）技术通过基因编码的酶，在活细胞原位将标签共价连接到邻近蛋白，无需直接物理结合即可捕获弱相互作用、瞬时互作及空间邻近蛋白，显著提升了蛋白质组学研究在原位空...
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邻近标记全流程实验指南：从质粒构建、标记富集到数据分析的超全解析（TurboID篇）引言 蛋白相互作用是细胞信号传导、代谢调控等生命活动的核心基础，传统研究方法（如免疫共沉淀）常受限于弱相互作用、瞬时相互作用或难溶性蛋白的捕获。邻近标记质谱（PL-MS）可破...
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从标记蛋白到锁定氨基酸：Spot-ID/BioID邻近标记实现分子空间组学突破引言 在蛋白互作研究中，我们始终面临一个核心困境：传统邻近标记（PL）技术虽能在活细胞内标记邻近蛋白，却因依赖“富集后检测非修饰肽段”的间接分析，难以区分“真正邻近的分子”与...
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「亚细胞定位」技术的深度对比：融合荧光蛋白/免疫荧光/亚细胞组分分离/邻近标记引言 在生物医学研究中，验证两个蛋白质是否存在相互作用（Protein-Protein Interaction, PPI），其核心目的已从单纯证明分子间的化学结合，转向验证互...
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有限蛋白水解质谱LiP-MS的跨界表演 —— 生物标志物筛选引言 提到蛋白质组学技术，大家可能会想到它在药物靶点筛选、蛋白质互作分析中的应用，但你知道吗？一款原本主打“小分子靶点筛选”的技术 —— LiP-MS（有限蛋白酶解 - 质谱...
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如何寻找「分泌蛋白」靶细胞的「膜上受体」②：基因融合酶标记法引言 上一期我们分享了基于体外纯化蛋白的化学偶联标记法，这种“先纯化，后修饰”的策略，特别适合难表达配体的受体鉴定。但对于大多数易于在哺乳动物细胞中表达的分泌蛋白而言，还有一...
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如何寻找「分泌蛋白」靶细胞的「膜上受体」①：体外化学偶联标记法引言 从肿瘤微环境中筛选出一个全新分泌蛋白，它能显著抑制癌细胞增殖。然而当开发靶向药物时，却卡在最关键的一步——找不到它在细胞膜上的受体。这并非个案：人类基因组中超过30%的...
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BioID、TurboID、APEX与PUP-IT四大邻近标记在「膜蛋白互作」应用中的深度对比引言 在后基因组时代的生物医学研究中，膜蛋白作为细胞与外界交互的核心门户，占据人类基因组编码蛋白的约30%，更是超过60%临床药物的直接作用靶点。但传统技术如免疫共沉淀（Co...
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从BioID到TurboID：12个案例解码植物蛋白互作与邻近标记的适配密码引言 在植物分子生物学中，蛋白质互作是细胞生命活动的核心，但在面对植物坚硬细胞壁、液泡释放的蛋白酶与次生代谢物，以及弱瞬时的核心调控互作时，传统方法往往力不从心。 邻近标记（...