18年发表在gut上 (IF: 31.793) 的文章
1. Preoperative NLR correlates with survival following PDAC resection
Fig 1a：使用standard ROC analysis分析，确定了optimal NLR cut-off是2.1。根据这个标准将病人区分为high (>2.1, n=286) 和 low (≤2.1, n=153)队列。在PDAC切除术后，high NLR的5-year survival是17.3%，low NLR则是26.5%。
ROC找cutoff值参考：
2. Neutrophils expressing CXCR2 are elevated in the blood and bone marrow of patients with human PDAC
Fig 1b：流式结果显示PDAC患者外周血和骨髓的CXCR2中性粒都显著增加。
CD15抗原也称X-半抗原，存在于包括嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在内的90%以上的粒细胞中，少部分存在于单核细胞中。[在几乎所有的慢性髓性白血病（CML）CD15阳性，急性淋巴细胞白血病（ALL）极少表达。R-S细胞和单核霍奇金细胞中，80%的经典型霍奇金淋巴瘤CD15阳性表达。该抗体主要用于霍奇金淋巴瘤和粒细胞肉瘤的诊断。]
Fig 1c, d：存活期>1年的患者比存活期<1年的患者，血和骨髓CXCR2+中性粒都显著更高，且血和骨髓CXCR2+中性粒百分比与患者存活时间呈负相关。
3. Increased expression of ELR+ chemokines correlates with the prevalence of tumour-infiltrating CXCR2+ TAN
Fig 2a：和此前的报道一致，作者发现和其他肿瘤相比，人PDAC肿瘤高表达GM-CSF 和 G-CSF, 而不是 M-CSF。
Fig 2b：和正常组织相比，人PDAC肿瘤的ELR+趋化因子CXCL1, CXCL2, CXCL5 和 CXCL8也显著升高。
ELR+趋化因子参考：生长调节致癌基因GRO
Fig 2c：免疫荧光结果显示，CXCL1, CXCL2, CXCL5 和 CXCL8的来源主要是neoplastic ductal cells而不是基质细胞。
Fig 2d, e：c图显示在这几个ELR+趋化因子中，CXCL5的fold change是最大的。而且这个基因的表达强度与CD15+ TAN和NE+ TAN都有很强的正相关。
Overall, this suggests that PDAC expression of ELR+ chemokines, in particular CXCL5, may be important in facilitating recruitment of CXCR2+ neutrophils.
4. PDAC tumours are infiltrated by CXCR2+ TAN with prognostic implications in human disease
Fig 2f：和正常胰腺相比，PDAC胰腺中CXCR2+ TAN显著增加。
Fig 2g：和外周血具有诊断意义的NLR一致，作者发现胰腺中低/中/高CD15+ TAN和CD8+淋巴细胞比值的中位存活期分别是2，1.5和1。
Fig 2h, i：高NE/CD8和CXCL5/CD8比值也与不良预后相关。
In summary, this suggests that the CXCR2+ TAN are a predominant immune infiltrate and have clinical significance in PDAC.
5. CXCR2 inhibition sequesters neutrophils in the blood and prevents TAN accumulation in orthotopic PDAC tumours
在发现了CXCR2 中性粒的增加后，作者在荷瘤小鼠上做了治疗。
Fig 3a, b：和正常胰腺相比，orthotopically implanted, syngenic KCKO pancreatic tumours（小鼠模型）存在GM-CSF, G-CSF 和 CXCR2 配体 CXCL1, CXCL2 和 CXCL5的高表达。（和前面Fig2 f, g中人的PDAC一致）
Fig 3c：荷瘤小鼠外周血和骨髓中CXCR2中性粒都显著增加。CXCRi治疗增加了外周血中性粒的绝对值，骨髓则没有显著变化（另外一个药物FOLFIRINOX也是一样的效果），提示外周粒细胞向组织局部的迁移下降。
Fig 3d：primary tumour的特征是存在大量的Ly6G+细胞，给了CXCRi治疗治疗之后显著改善。
Fig 3e：靶向CXCR2+ TAN之后，皮下KCKO tumour progression显著下降，肿瘤size减小。
Fig 3f：为了证实这些发现，作者检测了来自KPC基因工程模型的另一个同源PDAC细胞系的原位肿瘤(p48CRE/LSL-KrasG12D/p53flox/flox)，发现CXCR2i也阻止了模型中TAN的积累
Collectively, this suggests that CXCR2 blockade prevents neutrophil trafficking from the blood, reducing TAN with similar therapeutic efficacy to systemic depletion.
6. targeting a myeloid subset results in tumour compensatory recruitment of alternative bone marrow-derived cell populations
Fig 4a：此前的研究显示，在小鼠模型中，靶向CCR2治疗PDAC会出现Neutrophil substitution。因此作者检测了给予CCR2i治疗患者的胰腺活检样本，发现CXCR2+细胞增加。
Fig 4b：小鼠实验也是一样的结果
Fig 4c, d：作者在荷瘤的CCR2-/-鼠和荷瘤的CCR2i处理的野生鼠中，25天后对肿瘤组织行流式发现CXCR2+TAM代偿性替代，这一现象也发生在联合FOLFIRINOX化疗中（图B,C）。单独靶向CCR治疗，TAM升高；单独靶向TAM治疗，TAN升高；两者同时抑制，TAN和TAM均降低，且在联合FOLFIRINOX化疗中效果一致。
这一现象的一种可能解释是观察到与TAM的产生和招募相关的因素，即CSF1和CCL2，在阻断CXCR2+ TAN后有所增加。同样，CCR2i导致CXCL1、CXCL2、CXLC5和G-CSF表达增加。
Fig 4e：随之作者通过流式分析评估总肿瘤浸润骨髓情况，发现联合CCR2i + CXCR2i抑制治疗，或者单独CCR2i或者 CXCR2i 联合FOLFIRINOX治疗，都能防止这种代偿作用并减少肿瘤浸润骨髓细胞。
7. combined CCR2 plus CXCR2 blockade enhances chemotherapeutic efficacy and improves survival in tumour- bearing mice
Fig 4f：然后作者在构建的荷瘤鼠模型中，分别进行抑制实验。发现CCR2 + CXCR2联合阻滞剂可提高肿瘤小鼠的化疗疗效并提高生存率，而CCR2i和CXCR2i作为单一药物有效降低了既定的原位肿瘤重量和体积。即使用CCR2 + CXCR2阻滞剂可显著降低KCKO肿瘤，联合FOLFIRINOX化疗方案可以增加肿瘤对化疗的敏感性。
Fig 4g：最后表明FOLFIRINOX联合髓系抑制对生存期的影响。当髓系抑制与FOLFIRINOX联合使用时，肿瘤负担的减轻会增强。FOLFIRINOX联合CCR2i或CXCR2i进一步提高了KPC基因工程模型的原位肿瘤小鼠的存活率。此外，与任何一种联合相比，FOLFIRINOX双重CCR2 + CXCR2阻断对提高生存率最多。
总的来说，这表明，与单独使用的两种策略相比，同时使用CCR2和CXCR2靶向骨髓细胞募集可以提高化疗反应敏感性。
8. reduction of tumour-infiltrating myeloids increases effector T cells in PDAC-bearing mice
Fig 5a ,b：先作者在构建的肿瘤小鼠模型中说明靶向治疗对CD8+和CD4+ TIL的影响。通过靶向抑制CCR2或者CXCR2 25天后，对肿瘤组织行流式分析，发现肿瘤浸润髓样的减少却增加了小鼠的效应T细胞的量，联合抑制与单独抑制相比CD8+和CD4+ TIL的流入明显更大，当与FOLFIRINOX联合测试时也发现了这一点。
Fig 5c：随后作者检测了靶向治疗后CD4+亚群的变化。在原位移植肿瘤小鼠中，治疗25天后，流式分析显示CCR2i或CXCR2i单独抑制时CD4+TIL细胞百分比明显减低，联合抑制时，没有更进一步的变化，在联合FOLFIRINOX治疗时出现一致的结果。
Fig 5d ,e：接下来,作者评估IFNγ+CD8+TIL及激活状态的C8+细胞在靶向治疗后变化。荷瘤小鼠不同靶向处理25天后，肿瘤组织流式分析显示细胞内IFNγ增加，CD8+TIL细胞表面表达的CD44+ 、CD69+、CD62L标记物增加 。且联合靶向治疗后增加更多，尤其是激活状态的CD8+TIL细胞。
Fig 5f：然后为了证实这种激活状态CD8+TIL的增加反映了T细胞受体(TCR)对抗原的识别，作者接下来检测了Nur77GFP小鼠从PDAC肿瘤中提取的CD8+淋巴细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达，该表达在TCR刺激后上调。
抑制了介导免疫抑制的髓系细胞，肿瘤杀伤性的CD8T增加了，很有意义啊
总的来说，这些结果表明肿瘤浸润髓细胞的减少和效应因子的流入，靶向双趋化因子受体抑制可能是增强PDAC化疗反应的理想治疗策略。
9. Dual CCR2 plus CXCR2 blockade restores antitumour immunity in established PDAC tumours
Fig 5g：接下来作者在已建立的原位移植PDAC肿瘤中，比较靶向治疗对肿瘤的抑制情况。与对照组相比，CCR2i或CXCR2单独靶向治疗，肿瘤抑制率高，恢复了抗肿瘤免疫作用。然而，同时靶向CCR2+ TAM和CXCR2+ TAN进一步增加肿瘤抑制率，进一步增强抗肿瘤免疫，当与FOLFIRINOX联合使用时效果更好。
Fig 5h：然后作者对KCKO肿瘤鼠，联合趋化因子阻断与FOLFIRINOX 化疗治疗后25天，检测基因表达情况。结果发现，联合治疗后免疫抑制基因的表达减少与抗肿瘤免疫和细胞溶解性T细胞反应相关的因素的增加相对应。
Fig 5i：最后，正如作者的结果所示，髓系阻滞后的抗肿瘤活性是通过适应性免疫机制介导的，作者进行了CD8耗竭实验 用IgG 做对照，结果表明，在缺乏CD8+淋巴细胞的情况下，髓系阻滞的治疗效果消失。
综上所述，这些数据强调了骨髓来源的髓细胞在介导PDAC免疫逃避中的重要性，并为同时靶向CCR2+ TAM和CXCR2+ TAN提供了临床依据。
