前段时间做了核浆蛋白分别提取跑western的实验，不听说明书的劝，瞎踩了很多雷。在此记录下来，告诫自己不要乱来。
实验过程中使用的是弗德的核浆蛋白分离提取试剂盒。没有试过其他牌子的，所以不做比较。但是特别喜欢弗德的技术老师，每次遇到麻烦咨询问题，技术老师都能花上半小时到一个小时的时间各种科普，还很擅长举例子省得你听不懂。
首先附上核浆蛋白分离提取的原理：一般是先利用低浓度的盐，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白；然后使用含有SDS的bufferB通过增加蛋白的溶解度，获得胞浆蛋白；接着用高盐溶液提取核蛋白。
大致步骤（以一个10 cm 皿的细胞为例）：
1. 收集细胞沉淀（建议用2mL尖底EP管，方便吸干净上清），按照说明书提示加入1 mL胞浆蛋白裂解液A（细胞只有单层的情况下加500 uL裂解液），枪头吹打混匀后放于冰上静置20-30分钟。
2. 按比例加入buffer B，枪头轻轻吹打混匀静置一分钟后离心（不建议涡旋混匀，控制不好力度的情况下容易导致胞核蛋白溢出）
3. 轻轻吸取200 uL 上清，剩余上清弃去（注意避开沉淀吸干净上清）。视情况加入100-200 uL裂解液c（可以用中强度RIPA代替）。此后步骤没啥好说的。
总的来说，关键就是用尖底EP管，加入bufferB后不要涡旋。
