质粒5个特征：
独立复制，存在多克隆位点，含复制起点，有筛选标记，分子量大小合适（一般为1-10kb）。
质粒载体分类：
1）按功能分为克隆载体和表达载体，前者用于保存DNA片段，DNA测序，如用于DNA甲基化区域测序BSP，后者用于表达蛋白。
2）真核载体，原核载体，穿梭载体（既能在真核表达，又能在原核表达）;
质粒图谱了解
启动子：序列特异性，多为单向性，有位置和种属特异性.可分为组成型，能恒定表达，如U6/CMV;组织特异型，在特性组织才能表达的启动子;诱导型,如光诱导型\温度诱导型\化学物质诱导型.
核糖体结合位点,RBS/SD序列:位于起始密码子上游.
终止子
多克隆位点:含有不同酶切位点,可用于外源DNA插入.
调控因子:可以改变启动子的启动能力,分为正向,如CAP和CAMP激活,负向,如LacI会产生阻遏蛋白阻止转录,在乳糖和IPTG条件下可被解除.
标签:flag,HA,GFP等,有时为了增强观测效果会串联标签蛋白,需要注意标签在蛋白表达的N端或C端,可能会影响目的蛋白的功能;
质粒构建的目的:过表达蛋白,敲减RNA,敲除基因.
质粒导入实验技术:磷酸钙,电转染,脂质体等;
若为了获得稳转株,会借助病毒表达系统,如慢病毒,病毒基因组整合宿主细胞;腺病毒,游离基因组,独立表达;逆转录病毒等.
