三、cluster-荧光成簇-桥式PCR

​Illumina Sequencing by Synthesis(合成测序)

https://www.bilibili.com/video/av65485492/

结合上面视频更易懂

一、cluster——荧光成簇过程

二、桥式PCR步骤

构建好的DNA序列通过p7接头和芯片上的p7互补接头配对

加入dNTP和聚合酶,从引物开始沿着模板合成一条新的序列

加入碱溶液,双链变单链,新合成的链固定在芯片上,另一条没固定的(母链)被冲走

加入中性液体,单链发生弯曲,与芯片上的p5接头结合,形成桥

再加入dNTP和聚合酶,从p5引物开始合成双链,形成双链桥(此时双链都被固定在芯片上)

再加入碱溶液,双链变单链形成新的模板

如此循环形成簇

真滴牛批

成簇后,还是要让其变为单链,因为测序时需要边合成边测序,方法为切掉一个基团,断开与芯片连接,被冲走。

整个芯片上有上亿个cluster, 即上亿条序列,再乘以序列读长,即一次测序量。

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