Illumina Sequencing by Synthesis(合成测序)
https://www.bilibili.com/video/av65485492/
结合上面视频更易懂
一、cluster——荧光成簇过程
二、桥式PCR步骤
构建好的DNA序列通过p7接头和芯片上的p7互补接头配对
加入dNTP和聚合酶,从引物开始沿着模板合成一条新的序列
加入碱溶液,双链变单链,新合成的链固定在芯片上,另一条没固定的(母链)被冲走
加入中性液体,单链发生弯曲,与芯片上的p5接头结合,形成桥
再加入dNTP和聚合酶,从p5引物开始合成双链,形成双链桥(此时双链都被固定在芯片上)
再加入碱溶液,双链变单链形成新的模板
如此循环形成簇
真滴牛批
成簇后,还是要让其变为单链,因为测序时需要边合成边测序,方法为切掉一个基团,断开与芯片连接,被冲走。
整个芯片上有上亿个cluster, 即上亿条序列,再乘以序列读长,即一次测序量。