序 言
有些软件总能以某种形式劝退你，让你毫不犹豫的投入其他软件的怀抱，外加产生一种不吐不快的情愫，激发一种唯恐他人也会“遭此毒手”的正义感。软件之所以叫做软件，大抵是因为经过包装与测试，比较成熟且有很大的兼容性，至少按照文档来运行应该不会问题，如果动不动就出错那与脚本何异？
生信分析软件很大一部都属于小众软件，有些软件也许本身的出发点就是科研与文章，而好不好用能不能让更多的人使用并不重要。遇到这样的软件，那就启用咱们的万能躺平招式：分析软件千千万，不行咱就换一换。同时，对此类软件应该保持敬畏之心，那句话怎么说来着：明知山有虎，猛敲退堂鼓。不然浪费的可是自己宝贵的时间，下面咱就一起来看看今天的主角。
缘 起
为什么会用到SpectralTAD呢？这都源自于做TAD差异分析时使用的TADCompare软件，关于该软件也写过两篇帖子：[TADCompare：差异TAD分析]，[TADCompare 差异分析要留心]。TADCompare分析时可以接受预定于的TAD文件，而软件文档中call TAD用的就是SpectralTAD，这便有了下面的事情。
SpectralTAD一个专门用于从HiC接触矩阵中做TAD calling的R包，其使用一种基于滑动窗口的改进版光谱聚类方法来快速检测TAD。SpectralTAD将接触矩阵作为输入，并输出BED格式的数据框，其中包含TAD相对应的坐标位置。该工具包含SpectralTAD、 SpectralTAD_Par两个函数，分别为单CPU和多CPU模式。另外，该包接受多种格式，如n × n 、n × ( n + 3 )、3列等。
至此，感觉SpectralTAD一切还挺正常，跟着文档代码走一遭才知该软件非常人所能驾驭也，一起来看看怎么回事：
文档示例：
自己测试：
devtools::install_github("dozmorovlab/SpectralTAD")
library(SpectralTAD)
data("rao_chr20_25_rep")
tads = SpectralTAD(rao_chr20_25_rep, chr = "chr20", levels = 2, qual_filter = FALSE)
Converting to n x n matrix
Matrix dimensions: 2517x2517
Error in `vec_init()`:
! `x` must be a vector, not `NULL`.
Run `rlang::last_trace()` to see where the error occurred.
Warning messages:
1: Unknown or uninitialised column: `Group`.
2: Unknown or uninitialised column: `Group`.
这错误来的触不及防，也让人有点摸不到头脑。咋滴，这软件还认人不成？当然，软件不可能因人而异，但会因环境而异。经过一番倒腾，发现下面这一段代码：
else {
gap_order = order(-point_dist)
sil_score = c()
for (cluster in clusters) {
k = 1
partition_found = 0
first_run = TRUE
cutpoints = c()
while (partition_found == 0) {
new_gap = gap_order[k]
cutpoints = c(cutpoints, new_gap)
diff_points = which(abs(new_gap - cutpoints[-length(cutpoints)]) <=
min_size)
if (length(diff_points) > 0) {
cutpoints = cutpoints[-length(cutpoints)]
}
if (length(cutpoints) == cluster) {
partition_found = 1
}
else {
k = k + 1
}
}
if (any(is.na(cutpoints))) {
next
}
cutpoints = cutpoints[order(cutpoints)]
cutpoints = c(1, cutpoints, length(non_gaps_within) +
1)
group_size = diff(cutpoints)
memberships = c()
for (i in seq_len(length(group_size))) {
memberships = c(memberships, rep(i, times = group_size[i]))
}
sil = summary(cluster::silhouette(memberships,
dist_sub))
sil_score = c(sil_score, sil$si.summary[4])
Group_mem[[cluster]] = memberships
}
end_group = Group_mem[[which(diff(sil_score) < 0)[1]]]
if (length(end_group) == 0) {
end_group = dplyr::bind_rows()
}
else {
end_group = data.frame(ID = as.numeric(colnames(sub_filt)),
Group = end_group)
end_group = end_group %>% dplyr::mutate(group_place = Group) %>%
dplyr::group_by(group_place) %>% dplyr::mutate(Group = max(ID)) %>%
ungroup() %>% dplyr::select(ID, Group)
}
}
if (end == nrow(cont_mat)) {
Group_over = dplyr::bind_rows(Group_over, end_group)
end_loop = 1
}
else {
end_IDs = which(end_group$Group == last(end_group$Group))
start = end - length(end_IDs) + 1
if (length(start) == 0) {
start = end
}
end = start + window_size
end_group = end_group[-end_IDs, ]
Group_over = dplyr::bind_rows(Group_over, end_group)
if ((end + (2e+06/resolution)) > nrow(cont_mat)) {
end = nrow(cont_mat)
}
}
运行文档的代码之所以出错是由于end_group没有结果，dplyr::bind_rows(Group_over, end_group)合并数据时引发了错误，也由此找到了相关联的参数min_size：
tads = SpectralTAD(rao_chr20_25_rep, chr = "chr20", levels = 2, qual_filter = FALSE, min_size=4)
Error in `vec_init()`:
! `x` must be a vector, not `NULL`.
Run `rlang::last_trace()` to see where the error occurred.
Warning messages:
1: Unknown or uninitialised column: `Group`.
2: Unknown or uninitialised column: `Group`.
tads = SpectralTAD(rao_chr20_25_rep, chr = "chr20", levels = 2, qual_filter = FALSE, min_size=3)
Error in `vec_init()`:
! `x` must be a vector, not `NULL`.
Run `rlang::last_trace()` to see where the error occurred.
Warning messages:
1: Unknown or uninitialised column: `Group`.
2: Unknown or uninitialised column: `Group`.
tads = SpectralTAD(rao_chr20_25_rep, chr = "chr20", levels = 2, qual_filter = FALSE, min_size=2)
head(tads$Level_1)
# A tibble: 6 × 4
chr start end Level
<chr> <dbl> <dbl> <dbl>
1 chr20 50000 325000 1
2 chr20 325000 525000 1
3 chr20 525000 775000 1
4 chr20 775000 1200000 1
5 chr20 1200000 1450000 1
6 chr20 1450000 1775000 1
当自以为可以正常运行时，软件又告诉你没那么简单。帮助信息中虽提示可以通过out_format参数修改输出格式：juicebox 、 bedpe、hicexplorer、bed，但是一运行又掉入另外一个坑：
tads = SpectralTAD(rao_chr20_25_rep, chr = "chr20", levels = 2, qual_filter = FALSE, min_size=2, out_format='juicebox')
New names:
• `chr` -> `chr...1`
• `start` -> `start...2`
• `end` -> `end...3`
• `chr` -> `chr...4`
• `start` -> `start...5`
• `end` -> `end...6`
Error in `mutate()`:
ℹ In argument: `start = format(start, scientific = FALSE)`.
Caused by error:
! `start` must be size 1709 or 1, not 14.
算了，真心累了，不再折腾了，这个时候只想对软件说一句：就此别过，后会无期！
结 语
分析时还是挑知名度好，出场率高的软件吧，毕竟这样的软件更加成熟，即使出了问题也能快速找到相应的解决办法，用不着花费大量的时间在软件上面。除非没有更好的选择，否则还是不要啃硬骨头的好，不然时间浪费不说还可能消化不良，不如一开始就避而远之。
当然，不可否认，造成软件无法正常运行的原因很可能是与开发者的环境不同。所以，分析时使用软件更多的时候都是在与软件的环境和参数作斗争，躺不平的时候还要支棱起来：生信路不平，还需要缝缝补补。
