GL261细胞是小鼠（C57BL/6背景）胶质瘤（glioma）/胶质母细胞瘤（glioblastoma, GBM）模型细胞系，是脑肿瘤尤其是免疫肿瘤学研究中最经典的同基因（syngeneic）模型之一；1939年通过颅内注射3-甲基胆蒽（3-methylcholanthrene）诱导C57BL/6小鼠产生胶质瘤，后于20世纪90年代建立体外培养细胞系。细胞形态具有多形性（pleomorphic），呈胶质细胞/星形细胞样，部分细胞纺锤形（spindle-shaped）或成纤维细胞样（fibroblast-like），贴壁生长成单层。
细胞名称：小鼠胶质细胞瘤
细胞简称：GL261
产品货号：TCM-C793
种属来源：小鼠
组织来源：胶质瘤
细胞形态：成纤维细胞样
生长特性：贴壁生长
培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1%P/S
配套培养基货号：TCM-G793
传代比例：1:2-1:4，每2-3天换液一次
倍增时间：28-36h
培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃
冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存
推荐海星HyCyte®一步冻存液（即用型、无血清、无需程序降温），货号：GUCP-R201
质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性
小鼠胶质细胞瘤(GL261)培养注意要点
1. 小鼠胶质细胞瘤（GL261）生长特性：
小鼠胶质细胞瘤（Gl261）弱贴壁生长的细胞特性：细胞贴壁生长，细胞贴壁能力中等，形态多样，倍增时间良好，培养过程中偶见贴壁不牢或聚团情况，低温、运输等刺激形态易皱缩或脱落，可选择包被培养。
2. 小鼠胶质细胞瘤（GL261）培养注意事项：
① 该细胞贴壁不强，在遇到运输低温及震荡、室温静置太长时间、添加的培养基或其他试剂过冷等情况时会出现明显的细胞回缩变粗变短甚至脱落的现象，及时放回培养箱静置培养后可恢复正常。
② 消化控制：该细胞消化时间偏短，消化时注意控制消化时间，镜下细胞变圆轻拍培养瓶可以脱落，及时终止消化。
③ 吹打力度：轻柔吹打，避免产生大量气泡，气泡会影响细胞贴壁和增殖。
④ 试剂温度：胰酶、培养基、PBS 使用前需预热至 37℃，避免低温刺激细胞。
⑤ 血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。（PS：血清、培养基更换细胞状态差？直接使用对应专培（TCM-G793），细胞状态更稳定，简单又省心）。⑥ 密度控制：密度过低时，细胞生长速度减慢；长时间高密度培养细胞状态容易不佳，建议细胞生长至80%密度时传代。
⑦ 细胞培养过程中可能会有聚团情况出现，传代的时候注意尽量轻柔吹散细胞。若成团严重且难以解决，可尝试其他品牌的血清，或使用多聚赖氨酸/明胶包被的培养皿进行培养。
GL261细胞聚团、不贴壁处理办法
1. GL261细胞在培养阶段出现聚团、不贴壁现象处理办法：
(1) 轻微聚团、不贴壁，可重新消化：收集不贴壁细胞，PBS润洗后，胰酶消化时间比常规延长0.5min，吹打时增加1–2次轻柔吹打。
(2) 若聚团严重，可通过沉降的方式去除聚团细胞：
① 细胞正常消化收集至15mL离心管内进行离心，离心后去除上清，使用约2mL完全培养基重悬细胞。重悬后竖直离心管静置5-10min，取上方1.5mL左右细胞悬液（细胞团较大沉降速度较快）镜下观察是否为单颗细胞，如单颗细胞占大部分即可接种回培养器皿。如有大量细胞团可再进行沉降后取上方细胞悬液。
② 底部沉降细胞团较少时可以直接丢弃，较多时，收集完上层悬液后再次轻柔吹打或离心后胰酶消化1-2min，终止消化后正常离心重悬接种。
③ 处理后细胞聚团反复，建议更换更优质的血清或包被培养。
④ GL261细胞运输颠簸皱缩、聚团 (需37°C培养箱静置培养恢复)。
2. HyCyte® 0.1%明胶溶液步骤：
① 使用2-3 mL的HyCyte® 0.1%明胶平铺T25瓶底面即可；
② 37℃培养箱内包被0.5 h;
③ 包被结束后吸去明胶0.1%明胶;
④ 晾干包被的器皿后再使用。
相关参考文献：
1.Sanchez, V.E., Lynes, J.P., Walbridge, S. et al. GL261 luciferase-expressing cells elicit an anti-tumor immune response: an evaluation of murine glioma models. Sci Rep 10, 11003 (2020). https://doi.org/10.1038/s41598-020-67411-w
2.Szatmári T, Lumniczky K, Désaknai S, et al. Detailed characterization of the mouse glioma 261 tumor model for experimental glioblastoma therapy. Cancer Sci. 2006;97(6):546-553. doi:10.1111/j.1349-7006.2006.00208.x
3.Raphael Pineau, Pierre Jean Le Reste, Tony Avril, Ulrich Jarry, Eric Chevet, Diana Pelizzari-Raymundo,Protocol to generate two distinct standard-of-care murine glioblastoma models for evaluating novel combination therapies,
STAR Protocols,Volume 5, Issue 3,2024,103304,ISSN 2666-1667.
技术服务：CRISPR/Cas9细胞基因编辑、载体构建/文库病毒、分子诊断参考品/突变基因参考品/融合基因参考品、细胞稳转 / 细胞干扰
细胞试剂：HyCyte®干细胞/原代细胞/细胞株、三系诱导培养试剂、细胞专用培养基、基因编辑试剂盒、病毒现货、预筛选胎牛血清
